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臭氧自血回输疗法基础研究-红细胞

来源:臭氧治疗师联盟 浏览次数: 日期:2016/11/1

1.失去血浆保护的洗涤红细胞,悬浮在盐水中,对臭氧极为敏感,臭氧氧化活性能够修改细胞膜负电荷和/或导致细胞膜破裂,形成正铁血红蛋白和酶失活[2,14,6,15-17],因为红细胞失去了血浆抗氧化剂保护。臭氧能够对人类生理盐水洗涤红细胞造成较大的损害,证明红细胞外周血浆中具有强有力的抗氧化剂。在非生理条件下,臭氧,容易溶解于水,是氧气的10倍以上,与不饱和脂肪酸构成细胞膜的磷脂、氧化酶和细胞内谷胱甘肽(GSH)发生反应。  注意不要用退格键把所有文字删除,请保留一个或者用鼠标选取后直接输入,防止格式错乱。

2.V.Travagli等[15,16,20-26]报道,他们及其他的研究表明,暴露在治疗浓度 (臭氧浓度为10-80mg/L或血液中浓度0.21–1.68 umol/ml)下的红细胞,受到血浆抗氧化剂(尿酸、抗坏血酸、白蛋白)的保护,不会形成正铁血红蛋白。

3.已证实,血液中应用80mg/L以下浓度的臭氧进行治疗是安全的。 Ari Zimran等报道,暴露在正常治疗浓度下红细胞酶活动度、ATP、2,3二磷酸甘油不受影响,臭氧化血液样本溶血率小于2%。

4.大量实验数据表明,臭氧作用血液尤其低-中臭氧浓度(10-40ug/ml)不引起细胞膜的任何过氧化作用,红细胞通过抗氧化防御机制被保护。

5.Shinriki及Bocci V等报道,血液中加入1ml柠檬酸钠和接触100mg/L的臭氧相比,溶血分别为0.2%和0.5%,通过抗氧化防御机制被保护细胞磷脂膜。

6.作为药物,应用臭氧必须有一个精确合适的浓度,V Bocci等报道,有微量的红细胞裂解,可以忽略不计。如果抗凝剂为柠檬酸盐(常用柠檬酸盐、磷酸盐、右旋葡萄糖、CPD)裂解量由基础值0.5%上升到1.2%,如果抗凝剂为肝素可以达到1.8%。Shinriki等 报道为0%-0.27%。 •可是,经过洗涤的红细胞细胞裂解可达到10%,而且血液中臭氧含量超过一定量(达到200ug/ml),细胞裂解比例更高,伴随着钙离子(Ca2+)的流入,含肝素血液的红细胞的裂解也随之增强。这些数据清楚表明血液中臭氧浓度不应超过80ug/ml。

7.高铁血红蛋白含量事实上仍保持正常。Shinriki等报道变化范围,从1.91%±0.11%到2.21%±0.09%。V Bocci报道的测量结果一直低于此范围,与血红蛋白比较,大约为其含量的1%,从来没有发现海因茨小体;红细胞容积保持不变,暗示红细胞的体积并没有因渗透张力或者细胞的裂解而改变。高浓度的臭氧作用会使钾离子出现少量流失,但可迅速恢复到正常水平。

8.当血液暴露臭氧浓度达到80ug/ml时,红细胞的酶活性、Na/K-ATP酶、乙酸胆碱脂酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GSH-R)、G-6-PDH及过氧化氢酶等[38]也不被破坏,证明抗氧化系统能够足以保护酶和血红蛋白的活性。

9.现在普遍认为过氧化氢作为一个作用于不同的血细胞的主要细胞内信号分子已经被确认,红细胞清除大部分过氧化氢,还原型谷胱甘肽迅速氧化为GSSG,细胞对GSH / GSSG比值下降极为敏感,由于GSSG被排除或被GSH-R还原为GSH补充来纠正失衡,抗坏血酸或烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)提供电子转为NADP+,激活磷酸己糖途径,其中葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)是关键酶,已确定小量ATP的形成,但呈显着增加。

10.此外,由于细胞内pH值轻微下降的(波尔效应)和/或增加2,3 -二磷酸甘油酸(2,3-DPG)使血红蛋白氧解离曲线右移,提高向缺血组织中释放氧气以达到提高红细胞输氧能力。通过在改善外周动脉阻塞性疾病供氧方面研究已得到临床验证。臭氧治疗后随着红细胞柔韧性的提高,达到血液流变特性的改善,通过实验证明了这一点。Verrazzo等[**]报道血液在体外经臭氧处理后回输,收集外周闭塞性动脉病(POAD)患者血液样本发现,在红细胞膜上发生了轻微的过氧化反应,细胞膜的可塑性和通透性增强,从而膜的流动性增加;此外,随着膜表面的负电荷增加,红细胞的沉降率随之降低,由于纤维蛋白原含量减少而血浆粘滞度降低。

总之:在明确臭氧剂量范围内的实验(10-80微克/毫升或每毫升血液0.21-1.68mM)研究显示:仅存在(不超过25%)等离子体的有效的抗氧化能力短暂下降,由于氧化还原系统的效率在20分钟内能够完全复原[31,32],无红细胞及其它血液细胞损坏,溶血是可以忽略的(从0.4到1.2%)和高铁血红蛋白含量保持正常。

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